加入收藏
百奥莱博公司客服电话百奥莱博QQ百奥莱博QQ百奥莱博QQ
百奥莱博公司微信服务号

产品目录

炭疽杆菌单重荧光PCR检测试剂盒(分别有检测Capa/Rob/PAG的试剂盒)图片
产品货号:
SYA014
中文名称:
炭疽杆菌单重荧光PCR检测试剂盒(分别有检测Capa/Rob/PAG的试剂盒)
英文名称:
Capa/Rob/PAG Fluorescent PCR detection kit
产品规格:
48次/盒
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
一、简介
本试剂盒用三对炭疽杆菌特异性引物(Cap/robB/pagA),各结合一条特异性探针,用荧光PCR技术对炭疽杆菌核酸进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

二、用途
该试剂盒适用于检测皮肤水泡液、咽拭子、可疑食物等样本中的炭疽杆菌特异性核酸序列(pX01质粒-pagA基因;pX02质粒-cap基因;染色体-rpoB基因)进行扩增,用于炭疽杆菌感染的辅助诊断,其检测结果仅供临床参考。

三、试剂盒组成(48T)
组份 数量 规格
反应液(qPCR MIX) 1管 480μL/管
pagA荧光引物和探针 1管 240μL/管
Cap荧光引物和探针 1管 240μL/管
rpoB荧光引物和探针 1管 240μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
阳性对照(PTC) 1管 50μL/管

四、荧光PCR仪器适用范围
ABI系列、MJ系列、Roche系列,博日系列及其他荧光定量PCR检测仪。

五、储存条件及有效期:
本试剂盒于-20℃以下保存,有效期为6个月。

六、样品采集、前处理与DNA提取
6.1 样品采集
皮肤炭疽,取水泡液1mL;肺炭疽,采集咽拭子标本,放入标本采集管中;肠炭疽,取粪便1g。
6.2 样本前处理:
固体样本:手术剪剪碎混匀后取0.05g于研磨器中研磨,加入1.5mL生理盐水后继续研磨,待匀浆后转至1.5mL灭菌离心管中,8000rpm离心2min,取上清液100μL于1.5mL灭菌离心管中,液体样本:直接取上100μL于1.5mL灭菌离心管中。
6.3 DNA提取
可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液,按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套),并按照相应试剂盒说明进行操作。
对上述处理好的样本加入50uL核酸提取液,100℃恒温处理10min,13000rpm离心5min,取上清液转移至新的1.5mL EP管,-20℃保存;
 注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

七、检测步骤
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(qPCR MIX)、引物及探针,冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 10µL N×10µL
Cap或robB或pagA引物及探针 5µL N×5µL
总量 15µL N×15µL
计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM,淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。

八、结果分析
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
(1) 阴性对照(NTC):不应产生任何的扩增曲线。
(2) 阳性对照(PTC):均产生扩增曲线。
(3) 以上条件应同时满足,否则,此次试验视为无效。
8.3 结果判定
(1) 在试验成立的条件下,Ct值≤35的样本为阳性,表明核酸阳性。
(2) Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明核酸阴性。
(3) 如果Ct值>35,判为可疑样品。对于可疑样品,先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线,则为可疑阳性,否则判为阴性。
(4) 对于可疑阳性样品,重新抽提核酸,再次进行qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明核酸阳性;否则判为样本阴性。

九、注意事项:
(1) 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2) 所有使用的离心管应高压灭菌,而且必须不含DNA酶。
(3) PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等),防止实验室污染。
(4) 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
(5) 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

相关搜索:炭疽杆菌单重荧光PCR检测试剂盒(分别有检测Capa/Rob/PAG的试剂盒)Capa/Rob/PAG Fluorescent PCR detection kit
首页 |  关于我们 |  联系我们 |  在线咨询 |  网站地图
北京百奥莱博科技有限公司 京ICP备14007103号-3